焦慮癥是精神障礙中極為常見的一種，臨床實(shí)踐中，它經(jīng)常與其他類型的精神障礙共同存在。根據(jù)2019年全球病疾負(fù)擔(dān)研究的發(fā)現(xiàn)，焦慮癥在10至24歲青少年中，是導(dǎo)致傷殘調(diào)整生命年的第六大主要病疾。明暗箱實(shí)驗(yàn)（LDB）作為評(píng)價(jià)狀態(tài)焦慮動(dòng)物模型行為學(xué)的經(jīng)典方法，已被廣泛應(yīng)用于焦慮癥的發(fā)病機(jī)制研究和藥篩選中。在嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，LDB所引發(fā)的焦慮情緒主要源于明暗光線的刺激沖突，而其行為模式則受到多種因素的影響，包括實(shí)驗(yàn)裝置的設(shè)計(jì)（如形狀、材質(zhì)、尺寸等）、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的特性（如品系、年齡、性別等）以及實(shí)驗(yàn)操作的具體細(xì)節(jié)（如起始位置、記錄時(shí)間、重測(cè)測(cè)量以及周期節(jié)律等）。因此，本研究基于LDB作為狀態(tài)焦慮動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)方法和原理，深入探討了晝夜節(jié)律、光照面積、光照顏色以及光照強(qiáng)度等因素對(duì)昆明小鼠在LDB中行為模式的影響，旨在篩選出更加穩(wěn)定可靠的實(shí)驗(yàn)條件，以優(yōu)化LDB作為狀態(tài)焦慮動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)方法。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物  選用雄性昆明小鼠，實(shí)驗(yàn)環(huán)境控制在室溫（20±2）℃，并設(shè)置12小時(shí)黑暗（6:00～18:00）和12小時(shí)光照（18:00～6:00）的循環(huán)，小鼠可自由獲取食物和水。經(jīng)過一周的環(huán)境預(yù)適應(yīng)后，選取體重在（20±2）g的小鼠進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)裝置  為明暗箱，尺寸為45cm×27cm×27cm，由木質(zhì)材料制成。明暗箱分為三部分：大面積箱體（27cm×27cm×27cm），底部分成9個(gè)面積相等的方格（9cm×9cm）；小面積箱體（18cm×27cm×27cm），底部分成6個(gè)面積相等的方格（9cm×9cm）；以及兩箱體之間的可移動(dòng)隔板中央通道（7cm×7cm）。明箱區(qū)采用30W白燈泡，距離箱底40cm高處照明；暗箱區(qū)則采用30W紅燈泡（或其他實(shí)驗(yàn)用彩色燈泡），同樣距離箱底40cm高處照明。

明暗箱/黑白箱/light-dark box，XR-XB120，上海欣軟

實(shí)驗(yàn)操作  過程如下：操作者將昆明小鼠置于大面積箱體的正中央方格，并使用攝像系統(tǒng)記錄小鼠在5分鐘內(nèi)的行為變化。記錄的行為參數(shù)包括兩箱停留時(shí)間、水平運(yùn)動(dòng)、垂直運(yùn)動(dòng)、穿梭次數(shù)以及糞便粒數(shù)。水平運(yùn)動(dòng)記錄為小鼠四只爪子均進(jìn)入一格的次數(shù)，垂直運(yùn)動(dòng)記錄為小鼠兩前爪騰空或攀附墻壁的次數(shù)。納入實(shí)驗(yàn)分析的參數(shù)包括明區(qū)停留時(shí)間百分率（Ltime%）、明區(qū)水平運(yùn)動(dòng)百分率（Lcross%）、明區(qū)垂直運(yùn)動(dòng)百分率（Lrear%）、水平運(yùn)動(dòng)總得分（Cross）、垂直運(yùn)動(dòng)總得分（Rear）、總得分（Total = Cross + Rear）、穿梭次數(shù)（Transition）以及兩區(qū)糞便粒數(shù)（Lfbs，Dfbs）和糞便總粒數(shù)（Fbs = Lfbs + Dfbs）。

影響評(píng)估 為了完整評(píng)估昆明小鼠在明暗箱（LDB）實(shí)驗(yàn)中的行為模式，并探討不同實(shí)驗(yàn)條件對(duì)其行為的影響，我們?cè)O(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)方案。實(shí)驗(yàn)主要考察晝夜節(jié)律、光照面積、光照顏色以及光照強(qiáng)度等因素對(duì)小鼠行為的影響。

首先，晝夜節(jié)律是一個(gè)重要的影響因素，我們將其分為白天周期（18:00～6:00，標(biāo)記為Day）和黑夜周期（6:00～18:00，標(biāo)記為Night）兩個(gè)時(shí)段，以觀察小鼠在不同時(shí)間段內(nèi)的行為變化。

其次，光照面積也是一個(gè)關(guān)鍵因素。我們將明箱區(qū)分為大面積箱體（L3/5）和小面積箱體（L2/5）兩種條件，以探究不同光照面積對(duì)小鼠行為模式的影響。

為了更完整地了解光照對(duì)小鼠行為的影響，我們還設(shè)計(jì)了光照顏色和光照強(qiáng)度的實(shí)驗(yàn)。在光照顏色實(shí)驗(yàn)中，我們選擇了黃色、綠色、藍(lán)色和紅色四種不同顏色的燈光，以觀察小鼠對(duì)不同顏色光照的反應(yīng)。而在光照強(qiáng)度實(shí)驗(yàn)中，我們?cè)O(shè)置了15W、25W、40W、60W和100W五種不同的光照強(qiáng)度，以探究光照強(qiáng)度對(duì)小鼠行為模式的影響。

在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)上，我們采用了析因設(shè)計(jì)的方法。對(duì)于晝夜節(jié)律與光照面積的交互效應(yīng)，我們?cè)O(shè)置了四個(gè)實(shí)驗(yàn)組：Day-L3/5、Day-L2/5、Night-L3/5和Night-L2/5，每個(gè)組包含6只小鼠。對(duì)于光照顏色實(shí)驗(yàn)，我們?cè)诤谝怪芷谙逻M(jìn)行，分別使用黃色、綠色、藍(lán)色和紅色燈光，每組同樣包含6只小鼠。對(duì)于光照強(qiáng)度實(shí)驗(yàn)，我們也在黑夜周期下進(jìn)行，分別設(shè)置15W、25W、40W、60W和100W五種光照強(qiáng)度，每組包含6只小鼠。

通過記錄和分析小鼠在LDB實(shí)驗(yàn)中的行為參數(shù)，如明區(qū)停留時(shí)間百分率、水平運(yùn)動(dòng)百分率、垂直運(yùn)動(dòng)百分率、穿梭次數(shù)以及糞便粒數(shù)等，我們可以完整評(píng)估不同實(shí)驗(yàn)條件對(duì)小鼠行為模式的影響。這將有助于我們篩選出更加穩(wěn)定可靠的實(shí)驗(yàn)條件，以優(yōu)化LDB作為狀態(tài)焦慮動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)方法。

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